線(xiàn)粒體提取試劑盒現貨供應

線(xiàn)粒體提取試劑盒使用說(shuō)明

 一，試劑盒組份

二，說(shuō)明

線(xiàn)粒體提取試劑盒用于從動(dòng)物細胞或組織中分離出完整而純化的線(xiàn)粒體。適合于動(dòng)物軟組織（肝或腦組織）和硬組織（肌肉）以及培養細胞的線(xiàn)粒體的制備。其制備物產(chǎn)量高，可以被用于細胞凋亡、信號傳遞、代謝和蛋白組學(xué)等的研究。

三，操作步驟

1. 樣本處理

a. 組織勻漿：稱(chēng)取100~200 mg新鮮組織如肝臟、腦、心肌等，PBS或生理鹽水沖洗，洗凈血水，濾紙吸干，用剪刀剪為碎塊放入小容量玻璃勻漿器內。加入1.0 mL冰預冷的Lysis Buffer，0℃冰浴上下研磨組織20次；

b. 培養細胞勻漿：消化細胞，PBS洗滌，800 × g 5~10 min離心收集細胞。計數。每次提取需要5 × 10⁷個(gè)細胞，加入1.0 mL冰預冷的Lysis Buffer重懸細胞，將細胞懸液轉移到小容量玻璃勻漿器內，0℃冰浴研磨30~40次；

2. 將組織或細胞勻漿物轉移到離心管，4℃，1000× g 離心5 min；

3. 取上清，加入一新的離心管中，4℃，1000× g 再次離心5 min。

4．取上清，加入一新的離心管中，4℃， 12,000 × g 離心10 min。離心后的上清含胞漿成分，可從中提取胞漿蛋白。將上清轉移到新離心管，線(xiàn)粒體沉淀在管底；

5. 在線(xiàn)粒體沉淀中加入0.5 mL  Wash Buffer重懸線(xiàn)粒體沉淀，4℃，1000× g 離心5 min；

6．取上清，加入一新的離心管中，4℃， 12,000 × g 離心10 min。棄上清，高純度的線(xiàn)粒體沉淀在管底；

6. 用50 -100μL Store Buffer 或合適的反應緩沖液重懸線(xiàn)粒體沉淀，立即使用或-70℃保存。

四 注意事項：
1. 為保證獲得完整的線(xiàn)粒體，*是全程低溫操作。第二是快速。第三，在不破壞亞細胞器的情況下破碎細胞是制備線(xiàn)粒體的zui關(guān)鍵環(huán)節。與組織塊相比，培養細胞特別是貼壁培養細胞在用玻璃勻漿器勻漿時(shí)較難破壁，因而要選用小容量玻璃勻漿器、間隙嚴密的研杵上下研磨培養細胞。
2. 以離心力g計算正確的離心速度，不同的離心機可據此精確計算離心速度。
3. 進(jìn)行Western Blot和2D-膠電泳，可直接加入上樣緩沖液裂解線(xiàn)粒體。

五 儲存：四周內使用可4℃儲存，長(cháng)期置-20℃

轉速與離心力換算

G＝1.11×(10^-5)×R×[rpm]^２
G為離心力，一般以ｇ（重力加速度）的倍數來(lái)表示；

 [rpm] ２即：轉速的平方； R為半徑，單位為厘米。