發(fā)光底物HRP與其他底物的不同之處

發(fā)光底物HRP被廣泛使用是因?yàn)槠渚哂衅渌麢z測(cè)方法不具備的優(yōu)點(diǎn)，這些優(yōu)點(diǎn)使得化學(xué)發(fā)光成為大多數(shù)蛋白實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)方法。使用化學(xué)發(fā)光可以通過多次曝光獲得的成像結(jié)果。還可以將檢測(cè)試劑*去除，再對(duì)其他目的蛋白進(jìn)行檢測(cè)并成像，或?qū)z測(cè)條件進(jìn)行優(yōu)化。具有很寬的線性響應(yīng)范圍，從而可以檢測(cè)并定量很寬濃度范圍的蛋白質(zhì)。zui重要的是，化學(xué)發(fā)光在所有的檢測(cè)方法中具有zui高的靈敏度。

 

發(fā)光底物HRP是指當(dāng)?shù)孜锇l(fā)生化學(xué)反應(yīng)，產(chǎn)生的能量以光的形式釋放出來的過程。使用化學(xué)發(fā)光可以通過多次曝光獲得的成像結(jié)果；還可以將檢測(cè)試劑*去除，再對(duì)其他目的蛋白進(jìn)行檢測(cè)并成像，或?qū)z測(cè)條件進(jìn)行優(yōu)化。

發(fā)光底物HRP具有很寬的線性響應(yīng)范圍，從而可以檢測(cè)并定量很寬濃度范圍的蛋白質(zhì)。zui重要的是，發(fā)光底物HRP在所有的檢測(cè)方法中具有zui高的靈敏度。

 

發(fā)光底物HRP與其他底物不同之處在于只有在酶和底物發(fā)生反應(yīng)的時(shí)候才會(huì)產(chǎn)生瞬時(shí)的可被檢測(cè)的光。這與那些可產(chǎn)生穩(wěn)定有顏色產(chǎn)物的底物不同；些有顏色的沉淀在酶-底物反應(yīng)結(jié)束之后仍然存在于膜上。在化學(xué)發(fā)光免疫印跡中，底物是反應(yīng)限制試劑。一旦其耗盡，光就會(huì)逐漸變?nèi)醪⑾?。?shí)驗(yàn)中一定要使用適當(dāng)稀釋濃度的抗體，這樣才會(huì)在幾小時(shí)內(nèi)產(chǎn)生穩(wěn)定的光信號(hào)輸出，從而維持蛋白檢測(cè)的一致性和靈敏度。當(dāng)抗體沒被足夠稀釋時(shí)，永遠(yuǎn)不會(huì)獲得穩(wěn)定的光信號(hào)輸出。系統(tǒng)中太多的酶會(huì)快速氧化底物并終止信號(hào)。