發(fā)布時(shí)間: 2020-07-21 點(diǎn)擊次數: 3278次
Invitrogen反轉錄酶III是從克隆有莫洛尼氏鼠白血病病毒反轉錄酶基因的大腸桿菌中表達并經(jīng)過(guò)柱純化分離出來(lái)的重組蛋白,是由一個(gè)71kDa的單亞基組成的反轉錄聚合酶。本酶經(jīng)修飾,RNaseH的活性比普通的要弱很多,因此在合成cDNA鏈的過(guò)程中,RNA模板的降解降低,從而使得率提高。
Invitrogen反轉錄酶III的生理功能:
反轉錄過(guò)程由反轉錄酶催化,該酶也稱(chēng)依賴(lài)RNA的DNA聚合酶,即以RNA為模板催化DNA鏈的合成。合成的DNA鏈稱(chēng)為與RNA互補NA(cDNA)。
反轉錄酶都具有多種酶活性,主要包括以下三種活性。
?。?)DNA聚合酶活性
以RNA為模板,催化dNTP聚合成DNA的過(guò)程。此酶需要RNA為引物,多為賴(lài)氨酸的tRNA,在引物tRNA3'-末端以5'→3'方向合成DNA。
?。?)RNaseH活性(RNA酶)
由反轉錄酶催化合成的cDNA與模板RNA形成的雜交分子,將由RNaseH從RNA5'端水解掉RNA分子。
?。?)DNA指導的DNA聚合酶活性
以反轉錄合成的一條DNA單鏈為模板,以dNTP為底物,再合成第二條DNA分子。
除此之外,有些反轉錄酶還有DNA內切酶活性,這可能與病毒基因整合到宿主細胞染色體DNA中有關(guān)。